تست الایزا ایدز چیست ؟

What is an ELISA Aids test?

تست الایزا روشی آزمایشگاهی برای کشف ویروس در خون

تست الیزا  استانداردی جهانی برای استفاده در بیمارستان‌ها٬ بانک خون و سازمان‌های انتقال خون به ویژه در تشخیص ایدز و ویروس HIV می‌باشد.

در آزمایش الایزا خود ویروس مورد جستجو قرار نمی گیرد بلکه اندازه پادتن (آنتی‌بادی) تولید شده در بدن فرد آلوده به ویروس ٬ اندازه گرفته می شود و

از مزایای ویژه ی آن می توان به ارزان بودن و همچنین نسبتاً دقیق بودن آن اشاره کرد

نمونه خون گرفته شده در این روش آزمایشگاهی در دستگاه سانتریفیوژ  در دور بالا قرار گرفته می شود و پس از جداسازی سرم خون از ذرات دیگر ٬ یک ماده معرف (بسته به ویروس مورد ردیابی) به سرم خون اضافه می‌شود که محلول را رنگی می‌کند و وجود پادتن‌های ضد ویروس موردنظر را مشخص می‌سازد.

برای جلوگیری از رفع نتایج مثبت کاذب در روش الیزا از روش وسترن بلات برای دریافت تایید نهایی استفاده می شود.

الایزا نسل چهار

آزمایش الیزا معمولا برای تشخیص چه بیماری های انجام می شود؟

قبل از درخواست پزشک جهت تست های دقیق تر ، آزمایش ELISA اغلب به عنوان یک ابزار غربالگری مورد استفاده قرار می گیرد.

پزشک ممکن است در صورت بروز علائم بیماری فوق این آزمایش را پیشنهاد کند. پزشک ممکن است اگر بخواهد هر یک از این شرایط را رد کند ، این آزمایش را سفارش دهد.

اما معمولا درخواست انجام آزمایش الیزا در موارد زیر است

  • ویروس hiv که منجر به بیماری ایدز می شود
  • بیماری لایم که توسط نوعی کنه منتقل می شود
  • کم خونی بدخیم یا کم‌خونی پرنیسیوز
  • تب منقوط کوه‌های راکی
  • روتاویروس
  • کارسینوم سلول سنگفرشی
  • بیماری سفلیس
  • بیماری انگلی توکسوپلاسموز
  • آبله مرغان و زونا
  • ویروس زیکا

و البته بیشتر شهرت نام آزمایش الیزا در تست ایدز می باشد که استفاده از این روش بسیار شایع می باشد

فروشگاه رپید تست

آزمایش الایزا چگونه کار می کند؟

الایزا اینگونه کار می کند که برای اتصال آنتی ژن هدف ، به آنتی بادی های خاص تکیه می کنند و یک سیستم تشخیص را نشان می دهد تا میزان و مقدار اتصال آنتی ژن را نشان دهد

به منظور به حداکثر رساندن حساسیت و دقت سنجش ، صفحه باید به دقت، با آنتی بادی های با میل بالا پوشانده شود – فرآیندی که Boster Bio  آن را تسخیر کرده است.

معمولاً در صفحات پلی استایرن 96 چاه (یا 384 چاه) انجام می شود ، که به طور انفعالی آنتی بادی و پروتئین را به هم متصل می کنند.

الایزا نسل 4 چیست ؟

الایزا را می توان با تعدادی تغییر در روش اصلی انجام داد :

  • روش مستقیم
  • روش غیر مستقیم
  • روش ساندویچ
  • روش رقابتی

مرحله کلیدی  بیحرکتی آنتی ژن مورد علاقه می تواند با جذب مستقیم به صفحه سنجش یا به طور غیر مستقیم از طریق یک آنتی بادی ضبط شده که به صفحه متصل شده است ، انجام شود.

سپس آنتی ژن مستقیماً (آنتی بادی اولیه برچسب آنزیم) یا به طور غیرمستقیم (آنتی بادی ثانویه با برچسب آنزیم) تشخیص داده می شود.

آنتی بادی های شناسایی معمولاً با قلیایی فسفاتاز (AP) یا پراکسیداز ترب کوهی (HRP) برچسب گذاری می شوند. انتخاب زیادی از بسترها برای انجام الایزا با یک ترکیب پیوست HR یا AP موجود است.

وبلاگ رپید تست  طرز استفاده از کیت نواری اعتیاد

انتخاب بستر به حساسیت سنجش مورد نیاز و ابزار دقیق موجود برای تشخیص سیگنال (اسپکتروفتومتر ، فلورومتر یا نور سنج) بستگی دارد.

الایزا مستقیم چیست

روش مستقیم تست الایزا

برای تشخیص مستقیم ، یک آنتی ژن پوشیده شده به صفحه چند چاه توسط یک آنتی بادی که مستقیماً به یک آنزیم کونژوگه شده است ، شناسایی می شود.

در صورت عدم وجود کیت های تجاری الایزا برای پروتئین هدف ، این روش تشخیص گزینه مناسبی است

از مزایای این روش میتوان به سریع بودن آن اشاره کرد زیرا فقط از یک آنتی بادی و مراحل کمتری استفاده می شود همچنین واکنش متقاطع آنتی بادی ثانویه در این روش از بین می رود.

از معایب این روش نیز میتوانیم به این موارد اشاره کنیم:

  • ایجاد لکه سلولی سلول، که باید سلولهای غیر چسبنده را روی پوشش مواد باند شیمیایی چسباند.
  • رنگ پذیری آنتی بادی اولیه ممکن است با برچسب زدن با آنزیم ها یا برچسب ها تحت تأثیر منفی قرار بگیرند.
  • برچسب زدن آنتی بادی های اولیه برای هر سیستم خاص الایزا بسیار وقت گیر و گران است.
  • تقویت حداقل سیگنال و عدم انعطاف پذیری در انتخاب برچسب آنتی بادی اولیه از آزمایشی به آزمایش دیگر از معایب دیگر این روش می باشد.

الایزا غیر مستقیم

روش غیر مستقیم تست الایزا

برای تشخیص غیرمستقیم ، آنتی ژن پوشیده شده به صفحه چند چاه در دو مرحله یا لایه تشخیص داده می شود. ابتدا آنتی بادی اولیه بدون برچسب ، که مخصوص آنتی ژن است ، اعمال می شود، سپس آنتی بادی ثانویه با آنزیم به اولین آنتی بادی متصل می گردد.

حال به بررسی مزایا و معایب این روش تشخیص میپردازیم.

مزایای این روش به شرح زیر است:

  1. در این روش، طیف گسترده ای از آنتی بادی های ثانویه دارای لیبل بصورت تجاری در دسترس هستند متنوع است زیرا بسیاری از آنتی بادی های اولیه در یک گونه ساخته می شوند و از آنتی بادی ثانویه با برچسب مشابه می توان برای تشخیص استفاده کرد.
  2. حداکثر ایمنی آنتی بادی اولیه حفظ می شود زیرا برچسب زده نشده است.
  3. حساسیت افزایش یافته است زیرا هر آنتی بادی اولیه شامل چندین اپی توپ وجود دارد که می توانند توسط آنتی بادی ثانویه دارای برچسب محدود شده و باعث تقویت سیگنال شوند.

از معایب آن نیز میتوانیم به موارد زیر اشاره کنیم:

  1. واکنش متقابل ممکن است با آنتی بادی ثانویه رخ دهد ، و منجر به سیگنال غیر اختصاصی شود.
  2. یک مرحله جوجه کشی اضافی در این روش لازم است.

ساندویچ الیزا

ساندویچ الایزا

ساندویچ ELISA به طور معمول نیاز به استفاده از جفت های آنتی بادی همسان ، جایی که هر آنتی بادی برای یک قسمت متفاوت و غیر همپوشانی

(اپی توپ) از مولکول آنتی ژن اختصاصی است.

اولین آنتی بادی (معروف به آنتی بادی ضبط) به چاه ها پوشانده می شود. سپس محلول نمونه به چاه اضافه می شود. یک آنتی بادی دوم (معروف به

وبلاگ رپید تست  نحوه استفاده از کیت تست اعتیاد پنج کاره

آنتی بادی تشخیص) برای اندازه گیری غلظت نمونه استفاده می شود.

ساندویچ  الایزا مزایای زیر را دارد:

  1. اختصاصیت بالا: آنتی ژن / آنالیت بطور اختصاصی ضبط و شناسایی می شود
  2. مناسب برای نمونه های پیچیده (یا خام / ناخالص): آنتی ژن قبل از اندازه گیری نیازی به تصفیه ندارد
  3. انعطاف پذیری و حساسیت: هر دو روش تشخیص مستقیم یا غیرمستقیم قابل استفاده هستند.

 

مراحل اجرای یک تست الایزا ساندویچی

مراحل انجام آزمایش الیزا

مرحله 1: آنتی بادی ضبط شده به چاههای صفحه ELISA متصل می شود

مرحله 2: نمونه آن را به خوبی به آنتی ژن اضافه کنید که در نمونه متصل به آنتی بادی گیرنده است.

مرحله 3: میکروپلیت بشویید – مواد غیرمجاز شسته می شوند و فقط آنتی ژن مورد علاقه باقی می ماند

مرحله 4: اضافه کردن آنتی بادی تشخیصی – آنتی بادی تشخیص آنزیم آنزیم به یک سایت دوم در آنتی ژن مورد علاقه متصل می شود

مرحله 5: میکروپلیت بشویید – آنتی بادی های بی حد و حصر شسته می شوند و فقط آنهایی که خاص برای هدف مورد علاقه هستند باقی می مانند

مرحله 6: اضافه کردن بستر – بستر توسط آنزیم روی آنتی بادی تشخیص داده شده تبدیل می شود و تغییر رنگ ایجاد می کند

مرحله 7: خواندن صفحه – میکروپلیت خوان می تواند محصول واکنش رنگی را تشخیص داده و مقادیر چگالی نوری (OD) را به دست آورد.

مرحله 8: محاسبه نتایج – مقدار آنتی ژن در هر نمونه محاسبه و تجزیه و تحلیل می شود

 

الایزا رقابتی

الایزا رقابتی

این روش تست الایزا از قالب رقابتی است.

الایزای رقابتی ، همچنین به عنوان الایزای مهار کننده شناخته می شود ، یک روش مبتنی بر سطح / صفحه است ، که در آن صفحه با آنتی بادی های ضبط کننده واکنش پذیر به مولکول مورد علاقه پوشش داده شده است.

نمونه (حاوی مولکول مورد علاقه بومی) و پروتئین نوترکیب ترکیب شده آنزیم (مولکول رقیب) به چاههای روکش شده اضافه می شوند.

از آنجا که میزان مولکول آنزیم کونژوگه شده در هر چاه ثابت است ، سطح مولکول بومی در نمونه نسبت اتصال مولکول مزدوج آنزیم در مقابل مولکول بومی را تعیین می کند.

پس از یک دوره جوجه کشی ، هر آنتی بادی بی حد و حصر شسته می شود.

بستر آنزیمی (به عنوان مثال ، TMB برای HRP) به هر چاه اضافه می شود و به یک رسوب آبی تبدیل می شود ،مقدار آن به صورت خطی متناسب با مقدار آنزیم موجود در چاه است.

سپس رسوب با اضافه کردن محلول توقف اسید به زرد تبدیل می شود و غلظت رسوب زرد برای جذب نور در 450 نانومتر (مقدار OD) خوانده می شود. سپس با مقایسه هر چاه نمونه در برابر منحنی استاندارد ، از OD برای محاسبه میزان مولکول مورد علاقه در هر چاه استفاده می شود.

منحنی استاندارد با استفاده از همین اصل تولید می شود اما به جای اضافه کردن نمونه ها ، یک سری از مولکول های نوترکیب با غلظت های شناخته شده به چاه های 6-8 اضافه می شوند.

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

دکمه بازگشت به بالا